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Microscope laser confocal à  balayage

Le microscope laser confocal (monofocal) à  balayage ou microscope confocal à  balayage laser - MCBL (en anglais CLSM pour confocal laser scanning microscope) est un microscope optique permettant d'avoir une meilleure résolution, mais surtout une bien meilleure profondeur de champ que les microscopes à  lentille.

En microscopie optique classique, pour qu'une image soit nette, il faut que l'objet soit dans le plan focal du système optique. Lorsqu'un objet présente un relief important, ou bien lorsqu'il est incliné par rapport à  l'objectif, seule une partie de l'image est floue. Pour résoudre ce problème, on éclaire la surface non plus par un faisceau de lumière blanche, mais par un rayon laser, concentré par une lentille, qui balaie la surface.

Un détecteur optique enregistre l'intensité lumineuse en fonction de la position du spot laser sur l'objet. L'intensité n'est détectée que si le point de la surface de l'objet se trouve juste dans le plan focal de la lentille concentrant le laser (d'ou le terme "confocal" ou "monofocal"). Ainsi, en faisant varier la distance focale à  chaque balayage, on peut relever "point par point" la hauteur de la surface et l'intensité réfléchie. On peut ainsi recomposer une imge à  trois dimension par ordinateur. La résolution latérale est la taille du spot, environ 150 nm (on utilise des laser à  faible longueur d'onde, bleu ou ultraviolet).

On peut aussi récolter la lumière fluorescente au lieu de la lumière réfléchie. On ajoute ainsi une information physique ou chimique à  l'information topographique. Il est beaucoup utilisé en biologie pour l'étude des cellules.

Bien que la technique soit une technique optique, l'image produite est recomposée par ordinateur (ce n'est pas une image "vue").




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